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蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上,然后用特异性抗体淘金app某特定抗原的一种蛋白质淘金app技术,现已广泛应用于tg反波胆在蛋白水平的表达研究、抗体活性淘金app和疾病早期诊断等多个方面。



V3 Western 流程:

1. 蛋白电泳。利用Mini-PROTEAN® TGX Stain-Free预制胶或Criterion™ TGX Stain-Free预制胶,以及标准的Tris/甘氨酸缓冲液,快速分离蛋白质。TGX Stain-Free预制胶采用一种独特的配方,能够在15分钟内快速分离蛋白质。

2. 观察分离。通过免染技术,将凝胶放入ChemiDoc Touch或ChemiDoc™ MP成像系统中激活1分钟,即可观察蛋白分离。此技术的原理是将蛋白胶浸泡在三氯乙酸或氯仿中,然后通过紫外光照射。在三氯化合物存在时,紫外光驱使色氨酸发生反应,产物会发出可见区内的光,从而实现蛋白条带在胶上的定位。这样无需染色,也能对蛋白分离的情况了如指掌。

3. 蛋白转印。利用TransBlot Turbo转印系统和TGX Stain-Free预制胶,最快3分钟即可完成转印。TransBlot Turbo,又称为全能型蛋白转印系统,一次可转印4块mini胶或2块midi胶。它采用了一种新配方的转印缓冲液,并使用了一种特殊材质的滤纸。这种组合能够承受更大电流,使转印不仅更快,而且更完全。

4. 转印验证。同样,利用ChemiDoc Touch或ChemiDoc MP成像系统,能够对PVDF或NC膜上的蛋白进行观察,即时检查蛋白转印的效果,而不需要丽春红染色。如果转印有问题,那么后续就不需要浪费宝贵的一抗了。

5. Western blot验证。实验当然少不了参照。过去的Western blot实验通常以看家tg反波胆作为内参,来确定蛋白质的相对表达量。然而,研究也发现,这些蛋白在病变组织与正常组织间、不同的正常组织间以及同一组织的不同部位都呈现出差异表达。因此,如今人们倾向于选择总蛋白作为内参。利用ChemiDoc Touch或ChemiDoc™ MP成像系统以及Image Lab软件,研究人员能够以总蛋白来进行定量归一化,从而消除实验误差,得到更为可靠的结果。



客户提供:

1. 尽可能详细的背景资料,包括蛋白的种属、大小、参考文献等;
2. 新鲜样品(组织为>100 mg/样,细胞>107 个/样),若为冻存样品,请于-70 ℃以下保存并自备液氮以便运输;
3. 一抗,并标明来源和稀释度,也可让我公司代买。为保证质量,抗体zui好为进口单克隆抗体。
 

结果提供:

Western blot蛋白质浓度及电泳上样量;原始胶片、电子图片及结果;Western blot完整实验报告,包括实验步骤、使用仪器和试剂等。


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